酶標(biāo)儀基本知識及其檢測原理

酶標(biāo)儀有單波長和雙波長檢測功能有時使用者不知在什么情況下使用單或雙波長檢測。所謂的“單波長"就是使用一種對顯色具最大吸收的波長即450 nm或492 nm進(jìn)行比色測定；而“雙波長"則除了用對顯色具最大吸收的波長即450 nm或492 nm進(jìn)行比色測定外，同時用對特異顯色不敏感的波長如630 nm進(jìn)行測定，酶標(biāo)儀最后打印出來的吸光度則為二者之差。630 nm波長下得到的吸光度是非特異的，來自于板子上諸如指紋、灰塵、臟物等所致的吸收。因此，在ELISA比色測定中，最好使用雙波長，且不必設(shè)空白孔。

二、測定的吸光度范圍   

通常，酶標(biāo)儀的吸光度測定范圍在。0-2.5之間即可以滿足ELISA的測定要求。早期的酶標(biāo)儀可測定的吸光度一般在0-2.5之間，但現(xiàn)在基本上都做了拓寬，可達(dá)到3.5以上，并且能保持很好的精密度與線性。如Labsystems公司Dragon Wellscan MK-2的吸光度測定范圍為0-3.5，而Multiskan Ascent的吸光度測定范圍（Abs）達(dá)0-4.0，在0-4.0范圍，線性誤差不超過±2.0%，在0.3-3.0吸光度范圍內(nèi)，測定精密度CV小于±0.2%；3.0-4.0 Abs范圍內(nèi)，測定精密度CV小于士0.2%。因此，對于酶標(biāo)儀的吸光度范圍不必去刻意追求大的吸光度范圍，主要要看在一定的吸光度范圍內(nèi)的線性和精密度如何。

三、光學(xué)系統(tǒng)   

酶標(biāo)儀的光學(xué)系統(tǒng)采用的是垂直光路多通道（通常為8或12通道，亦有單通道）檢測，一般為硅光管或光導(dǎo)纖維，除測定通道外，有的酶標(biāo)儀還有一個參比通道，每次測定可進(jìn)行自我校準(zhǔn)。酶標(biāo)儀的光學(xué)系統(tǒng)功能如何，均可通過酶標(biāo)儀測定的吸光度范圍、線性度、精密度和準(zhǔn)確度等體現(xiàn)出來。光學(xué)系統(tǒng)好的話，則上述指標(biāo)也應(yīng)較佳。測定的精密度與測定通道之間的均一性有直接關(guān)系。單通道可避免因通道不同所致的差異。

四、檢測速度   

酶標(biāo)儀的檢測速度是指其完成比色測定所需要的時間。檢測速度快，有利于提高檢測的精密度，即避免由于測定過程中，因測定時間不同所致的各微孔間吸光度間的差異。目前市場上常見的酶標(biāo)儀檢測速度都非常快，通常在數(shù)秒鐘內(nèi)，如Labsystems公司Dragon Wellscan MK-2和MK-3檢測96孔只需2s（連續(xù)模式）或5s（步進(jìn)模式）。Multiskan Ascent為單通道檢測，亦只需9s（連續(xù)模式）或14s（步進(jìn)模式）。又如BioRad公司的Benchmark的檢測速度單波長為7s，雙波長為15s。

五、震板功能   

酶標(biāo)儀的震板功能是指酶標(biāo)儀在對ELISA板孔進(jìn)行比色測定前對其進(jìn)行振蕩混勻，使板孔內(nèi)顏色均一。目前市場上常見的酶標(biāo)儀均有震板功能，所不同的是震板方式，有的可按上下、左右或旋轉(zhuǎn)等方式及振蕩幅度等任意調(diào)節(jié)，如Labsystems的MK-2；有的則較為固定，如BioRad 550。使用有震板功能的酶標(biāo)儀，在進(jìn)行ELISA測定顯色反應(yīng)完成加入終止劑后，可不必振蕩混勻，直接放人酶標(biāo)儀上測定即可。

六、溫育功能   

溫育功能是指酶標(biāo)儀本身能按要求自動精確地控制儀器內(nèi)部的溫度，使得ELISA測定中微孔板條的溫育過程可在儀器內(nèi)部完成，而無需再外配溫箱。目前，只有少部分酶標(biāo)儀具有此種功能，如Labsystems公司的Multiskan Ascent，BioRad公司的Benchmark和Biotek公司的ElxS08等。溫育功能只是酶標(biāo)儀的一個附加功能，是否具有并不能說明酶標(biāo)儀檔次的高低及儀器的優(yōu)劣。作為實(shí)驗(yàn)室是否選擇，則可根據(jù)自己實(shí)驗(yàn)室的條件及需要來決定。